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Fille du capitaine de police John Stacy, Gwen Stacy était une adolescente rebelle, s’habillant de manière à attirer l’attention sur elle et utilisant son intelligence et son astuce pour la garder ensuite. Transférée au lycée de Midtown High, elle se retrouva parmi la poignée d’adolescents qui eurent la chance de rencontrer les X-Men au centre commercial voisin, ignorant qu’elle était beaucoup plus proche d’un autre héros costumé, son copain du lycée Peter Parker qui était secrètement Spider-Man. Peu après, elle fit une impression beaucoup plus négative auprès des autres élèves quand elle n’hésite pas à sortir un couteau pour menacer un autre lycéen, Harlan Kong, après qu’il avait agressé Parker ; du coup, Gwen fut temporairement exclue du lycée. S’étant du coup faite une réputation d’adolescente dangereuse, elle devint rapidement l’amie de Parker et de sa petite amie, Mary Jane Watson, avant d’être finalement pleinement acceptée, bien qu’avec réticences, par les autres lycéens ; Watson elle-même eut initialement des difficultés à supporter la présence de Gwen, convaincue qu’elle cherchait à faire de Peter Parker son petit copain. Quand la mère irresponsable de Gwen quitta le domicile conjugal avec un autre homme, la jeune fille, quasiment suicidaire, trouva du réconfort auprès de Parker, dont la tante, May Parker, accepta de prendre Gwen sous son aile, l’aidant à faire face à ses problèmes familiaux. Quelques jours après, quand il devint évident que Ginger Stacy n’allait pas revenir auprès de son mari et de sa fille, May Parker proposa à Gwen de s’installer chez elle quand cela s’avérait nécessaire, de manière à ce que son père, souvent obligé de s’absenter à cause des urgences de la police, soit certain que sa fille était en sécurité en son absence. En revanche, la présence régulière de Gwen chez les Parker créa des tensions entre Peter Parker et Watson, qui était agacée de la nouvelle proximité de la jolie blonde et de son petit ami.
Malheureusement, le capitaine John Stacy trouva la mort peu après, tué par un criminel qui se faisait passer pour Spider-Man et Gwen, qui avait jusque là défendu les héros costumés, développa une haine pour le héros, qui ne diminua pas, même lorsque fut dévoilé que le coupable était un imposteur. Quand sa mère refusa d’assurer la garde de Gwen, celle-ci resta chez les Parker, qu’elle commençait à considérer comme une famille de substitution. Quand elle découvrit accidentellement l’identité secrète de Peter Parker, Gwen, qui se demandait toujours quel Spider-Man avait assassiné son père, alla jusqu’à le menacer d’un revolver, exigeant, en larmes, la justice pour son père, mais Peter Parker sut trouver les mots pour la calmer et la convainquit de son innocence.
La connaissance par Gwen du secret de Peter Parker la rapprocha encore de Peter Parker et Watson (qui connaissait aussi cette double identité), qui, après avoir brièvement rompu avec Peter Parker, fut rassurée par Gwen qu’elle n’avait aucune intention de lui voler son petit ami, en lequel elle voyait avant tout son petit frère super-héros. Mais la tragédie continua à frapper Gwen. La même nuit de sa réconciliation avec Watson, Gwen fut tuée par la créature vampirique appelée Carnage, qui avait été attirée vers la demeure des Parker ; son décès fut un terrible coup pour Spider-Man, et l’impact émotionnel éloigna de nouveau le héros et Mary Jane Watson, d’autant que Peter Parker se sentait responsable de la mort de Gwen, ayant accepté de donner des échantillons biologiques au Dr Curt Conners, qui mena les expériences qui donnèrent naissance à Carnage. Quelques jours après, Flash Thompson fit une remarque déplacée concernant le décès de Gwen, ce qui déclencha une bagarre entre lui, Peter Parker, Watson, Kong et Liz Allan, amenant les cinq adolescents à passer en cellule. C’est là que Thompson révéla aux autres qu’il avait eu le béguin pour Gwen depuis son arrivée au lycée et s’en voulait de n’avoir jamais osé l’inviter.
Plusieurs semaines après, Gwen Stacy sembla réapparaître, bien vivante, se présentant, une nuit, chez les Parker. Lorsque le SHIELD arriva sur place pour appréhender Peter Parker à cause du chaos qu’avait provoqué un de ses clones, « Gwen » se révéla être capable de se transformer en une créature semblable à celle qui avait tué la Gwen originale. Tentant de s’enfuir, « Gwen » fut abattue par une arme énergétique du SHIELD, qui lui redonna sa forme humaine ; après avoir perdu conscience, elle fut capturée par le SHIELD. Il allait être découvert que cette nouvelle Gwen avait été littéralement créée par Otto Octavius et Ben Reilly, travaillant pour le compte du FBI, au sein de « l’Expérience Stacy » en se basant sur la forme de vie vampirique développée par Reilly et Conners, et l’une de ses victimes, Gwen Stacy. Durant son confinement au Triskélion, le SHIELD effectua des expériences sur le monstre qui était en elle, le plaçant à proximité d’un fragment de la Tablette de l’Ordre et du Chaos. Cependant, cela se révéla une erreur car Carnage trouva suffisamment de puissance pour échapper à ses geôliers. Il acquit aussi la faculté de ranimer toutes les personnes dont il s’était nourri en faisant d’elles des copies de lui-même. Spider-Man, dans son uniforme noir, pénétra au Triskélion et triompha du monstre. Le SHIELD ramena la créature en détention, pendant que Spider-Man ramenait le fragment de la tablette dans son dimension d’origine.
Après cet incident, le clone de Gwen Stacy suivit une forme de thérapie mise au point par Tony Stark et une équipe de médecins du Triskélion. Durant l’une de ses séances de thérapie, Norman Osborn (alias le Bouffon) provoqua une évasion massive, dont « Gwen » tira partie en s’échappant elle aussi, profitant de la confusion. Gwen nagea jusqu’à Manhattan et retourna à la maison des Parker dans un état de confusion et de terreur, alors que le visage de Carnage apparaissait sur son corps. Alors que « Gwen » et Peter discutaient, Eddie Brock arriva sur place, tentant de s’introduire dans la maison afin de récupérer son symbiote perdu, sachant que celui-ci était parti retrouver Peter Parker. Celui-ci, reprenant le symbiote de Venom, attaqua Brock, leur combat se poursuivant sur le toit d’un centre industriel voisin, pendant que « Gwen » les suivait secrètement. Au cours de la bataille, Brock récupéra le symbiote et était sur le point de tuer Parker quand « Gwen » réussit à intervenir, utilisant ses propres capacités pour repousser Brock. Cependant, ce dernier absorba alors le symbiote Carnage dans son symbiote de Venom, faisant de « Gwen » un simple clone de la première Gwen Stacy.
Le SHIELD et Iron-Man arrivèrent à leur tour, quelques instants après que Venom s’était enfui. De nouveau, ils firent subir des examens à « Gwen » au Triskélion, pendant que Peter et May Parker se rendaient également à la base du SHIELD. Peter Parker interrogea rapidement Stark pour savoir qui, exactement, était « Gwen ». Stark expliqua aux Parker que Carnage, ayant absorbé la matériel génétique de Gwen Stacy, avait construit une réplique complète en tout point de son corps et que le symbiote ayant été extrait de son corps par Venom, il ne restait que Gwen Stacy et qu’étant biologiquement à 100% la première Gwen Stacy, souvenirs compris, il ne leur revenait pas de décider qu’elle était autre chose que Gwen Stacy elle-même. Bien que tous les tests montraient, à ce moment-là, que Gwen n’était rien qu’une simple adolescente, la directrice du SHIELD Carol Danvers tenta de maintenir Gwen en détention mais Peter et May Parker furent capables de trouver les arguments pour obtenir sa libération pour la leur confier, recevant le soutien de Stark dans leur proposition.
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Pendant l’absence de Gwen, Peter Parker et Mary Jane Watson s’étaient séparés et Gwen devint alors la petite amie de Peter. Cette situation ennuya quelque peu May Parker, qui se mit à insister qu’elle ne voulait pas de « polichinelle » sous son toit (une remarque qu’elle avait cependant déjà faite, par le passé, à Peter et Watson). Mais, finalement, Gwen décida de rompre avec Peter, se plaignant qu’il ne donnait pas le sentiment de vouloir rester avec elle, ni d’être attiré par elle, ce que Peter nia avec la plus grande fermeté, mais en vain. Ayant appris qu’Osborn et les Six s’étaient de nouveau échappé, Peter Parker ordonna à Gwen et May Parker de fuir pour leur sécurité pendant qu’il s’occupait d’Osborn. Mais, alors qu’elles étaient sur le point de quitter New York, May Parker reçut un coup de fil d’un voisin, l’informant que Peter Parker était Spider-Man (ce qu’elle savait depuis longtemps) et était dans leur jardin, brutalement attaqué par cinq autres surhumains. Refusant de le laisser, elles firent demi-tour, arrivant chez elles pour voir Peter presque battu à mort par Osborn, même s’il leur affirma se sentir bien dès qu’il les aperçut. Mais, après un ultime échange de coups avec Osborn, Peter mourut dans les bras de sa tante, tandis que Gwen assistait à la scène avec horreur, les deux femmes se jetant bientôt dans les bras l’une de l’autre.
Quelques jours plus tard, Gwen convainquit May Parker d’accepter la proposition de Stark de les emmener à Paris, en France, afin qu’elles puissent y commencer une nouvelle existence. Pour éviter d’être reconnue par la presse, Gwen coupa alors ses cheveux, qu’elle teint en noir. Plusieurs mois après, un nouveau Spider-Man apparut à New York, ce qui attira immédiatement l’attention de Gwen et de May Parker, qui rentrèrent presque de suite aux Etats-Unis, afin de le rencontrer. Mais, avant cela, elles se retrouvèrent face à un Spider-Man venu d’une autre réalité (la Terre-616), avec lequel elles partagèrent leurs souvenirs et lui les siens. Juste quelques instants après, le nouveau Spider-Man, Miles Morales, se fit connaître de Gwen et May Parker, avant de suivre le SHIELD et l’autre Spider-Man. Quand les Etats-Unis faillirent être déchirés par une nouvelle guerre civile, Gwen et May Parker réussirent à retrouver Morales dans un vieil entrepôt, où elles lui donnèrent les anciens lance-toiles de Peter Parker, lui montrant ainsi qu’elles le soutenaient dans son choix de relever l’héritage de Spider-Man. Quand le Bouffon s’échappe après la dissolution du SHIELD, il retourna chez les Parker, se retrouvant bientôt face à face au nouveau Spider-Man. C’est alors que le premier Spider-Man apparut à son tour, venant en aide à Morales, et à la grande surprise de tout le monde, surtout Gwen et May Parker. Peu après, le Bouffon ayant pris la fuite, les deux femmes retrouvèrent leur Spider-Man chez Mary Jane Watson, découvrant que ses pouvoirs lui avaient apparemment permis de revenir à la vie, exactement comme Osborn. Les deux Spider-Men s’associèrent pour vaincre le Bouffon, puis Peter Parker annonça à Gwen et May Parker qu’il avait décidé de partir à la recherche de lui-même et du mystère de sa résurrection.
La Gwen Stacy originale ne possédait aucun pouvoir. Sa réplique, initialement, possédait plusieurs des capacités de Spider-Man, à cause du symbiote de Carnage, dont une force surhumaine et la faculté d’adhérer aux surfaces ; ce symbiote était aussi capable de tisser sa propre toile à partir de sa propre substance corporelle. Depuis que le symbiote lui a été retirée, la nouvelle Gwen Stacy ne possède plus aucune capacité surhumaine.
Gwen Stacy est une lycéenne intelligente, bien qu’imprévisible, avec une perspective très personnelle sur de nombreux sujets. Elle prétend posséder un « sixième sens » quasiment surhumain qui lui permet d’estimer si quelqu’un est une bonne personne ou non. Elle a peu d’hésitation à menacer quelqu’un d’une arme et possède quelques talents d’autodéfense, vraisemblablement inculqués par son père.
Gwen Stacy a déjà tenu en main un couteau et un revolver ; toutefois, elle ne les as jamais utilisés, les employant comme accessoire de menaces.